ATCC27661標(biāo)準(zhǔn)菌株原裝0代菌株ATCC標(biāo)準(zhǔn)菌株

使用 - 80℃冰箱保存 ATCC 菌株時(shí)，需要注意以下幾個(gè)方面的問(wèn)題：
菌株準(zhǔn)備
菌液濃度：確保用于保存的菌株處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，此時(shí)的菌株活力較強(qiáng)。一般來(lái)說(shuō)，菌液濃度應(yīng)達(dá)到一定標(biāo)準(zhǔn)，例如對(duì)于細(xì)菌，通常要求菌液的 OD 值（光密度）在 0.6 - 0.8 左右，以保證有足夠數(shù)量的活菌用于長(zhǎng)期保存。
保護(hù)劑使用：添加合適的保護(hù)劑是非常關(guān)鍵的。常用的保護(hù)劑如甘油，其終濃度一般在 15% - 30% 之間。甘油濃度過(guò)高可能會(huì)對(duì)菌株產(chǎn)生毒性，過(guò)低則不能有效保護(hù)菌株免受冷凍損傷。在添加甘油時(shí)，要確保其與菌液充分混合均勻。
凍存管選擇
材質(zhì)與質(zhì)量：應(yīng)選用高質(zhì)量、耐低溫的凍存管，通常由聚丙烯等材質(zhì)制成。優(yōu)質(zhì)的凍存管具有良好的密封性和耐低溫性能，能防止在 - 80℃環(huán)境下破裂或泄漏。
規(guī)格合適：根據(jù)菌株的量選擇合適規(guī)格的凍存管，一般常用的有 1.5 mL 或 2.0 mL 的凍存管，避免使用過(guò)大或過(guò)小的凍存管，以保證菌液在管內(nèi)有合適的空間，且便于凍存和復(fù)蘇操作。
冷凍過(guò)程
緩慢降溫：為了減少冰晶對(duì)菌株細(xì)胞的損傷，應(yīng)采用緩慢降溫的方式?？梢詫⒀b有菌株的凍存管先放入 - 20℃冰箱中預(yù)冷 2 - 4 小時(shí)，然后再轉(zhuǎn)移至 - 80℃冰箱。也可以使用專門的冷凍盒，如含有異丙醇的梯度冷凍盒，它能以相對(duì)均勻的速度降溫，使菌株更好地適應(yīng)低溫環(huán)境。
避免反復(fù)凍融：盡量避免對(duì)同一管菌株進(jìn)行多次凍融，因?yàn)槊看蝺鋈谶^(guò)程都可能對(duì)菌株造成損傷，導(dǎo)致菌株活力下降或基因突變。如果需要使用多支凍存管中的菌株，應(yīng)分別取出解凍，而不是將一支凍存管反復(fù)凍融。
冰箱維護(hù)與管理
溫度監(jiān)測(cè)：定期監(jiān)測(cè) - 80℃冰箱的溫度，確保其溫度穩(wěn)定在 - 80℃左右，波動(dòng)范圍最好控制在 ±5℃以內(nèi)。可以使用溫度記錄儀或溫度計(jì)進(jìn)行監(jiān)測(cè)，并做好記錄。如果發(fā)現(xiàn)溫度異常，應(yīng)及時(shí)查找原因并進(jìn)行修復(fù)。
定期除霜：冰箱內(nèi)的霜層會(huì)影響制冷效果，因此需要定期除霜。除霜時(shí)應(yīng)注意避免對(duì)菌株造成影響，可以將菌株暫時(shí)轉(zhuǎn)移至其他備用的 - 80℃冰箱或液氮罐中，待除霜完成、冰箱恢復(fù)正常溫度后再放回。
空間規(guī)劃：合理規(guī)劃冰箱內(nèi)的空間，將不同類型或來(lái)源的菌株分類存放，并做好標(biāo)記?？梢允褂脙龃婕芑騼龃婧羞M(jìn)行整理，以便于查找和取用菌株。同時(shí)，要留出一定的空間用于空氣流通，以保證制冷效果均勻。
記錄與標(biāo)識(shí)
詳細(xì)記錄：建立詳細(xì)的菌株保存記錄，包括菌株的名稱、ATCC 編號(hào)、保存日期、保存條件、凍存管數(shù)量等信息。記錄還應(yīng)包括菌株的來(lái)源、相關(guān)的實(shí)驗(yàn)記錄以及任何與菌株特性變化有關(guān)的信息，以便在需要時(shí)進(jìn)行查詢和追溯。
清晰標(biāo)識(shí)：在凍存管上用防水、耐低溫的標(biāo)記筆清晰地標(biāo)注菌株的名稱、ATCC 編號(hào)、保存日期等關(guān)鍵信息。也可以使用標(biāo)簽貼紙，但要確保貼紙?jiān)诘蜏丨h(huán)境下不會(huì)脫落或模糊。此外，還可以在凍存架或凍存盒上進(jìn)行標(biāo)識(shí)，方便快速定位所需菌株。

微生物保藏中心的資源在農(nóng)業(yè)領(lǐng)域應(yīng)用廣泛，涵蓋土壤改良、作物生長(zhǎng)促進(jìn)、病蟲(chóng)害防治等方面，具體如下：
土壤改良與肥力提升
增加土壤養(yǎng)分：保藏中心的一些微生物，如根瘤菌、固氮菌等，具有固氮作用，能將空氣中的氮?dú)廪D(zhuǎn)化為植物可吸收的氮素營(yíng)養(yǎng)。解磷菌、解鉀菌則可分解土壤中難溶性的磷、鉀化合物，使其轉(zhuǎn)化為植物可利用的形態(tài)，增加土壤養(yǎng)分有效性，提高土壤肥力。
改善土壤結(jié)構(gòu)：某些微生物在生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)分泌胞外多糖等物質(zhì)，這些物質(zhì)可以將土壤顆粒黏結(jié)在一起，形成穩(wěn)定的團(tuán)聚體，改善土壤的通氣性、透水性和保水性，有利于農(nóng)作物根系生長(zhǎng)和發(fā)育。
促進(jìn)作物生長(zhǎng)
產(chǎn)生植物生長(zhǎng)激素：保藏的一些微生物，如芽孢桿菌、假單胞菌等，能夠產(chǎn)生生長(zhǎng)素、細(xì)胞分裂素、赤霉素等植物生長(zhǎng)激素，促進(jìn)作物種子萌發(fā)、根系生長(zhǎng)、植株發(fā)育，提高作物的產(chǎn)量和品質(zhì)。
增強(qiáng)植物抗逆性：部分微生物可誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，增強(qiáng)植物對(duì)干旱、高溫、低溫等逆境條件的適應(yīng)能力。例如，一些叢枝菌根真菌能夠與植物根系形成共生體，幫助植物吸收更多的水分和養(yǎng)分，提高植物在干旱條件下的生存能力。
病蟲(chóng)害防治
拮抗病原微生物：微生物保藏中心有許多具有拮抗作用的微生物，如木霉菌、鏈霉菌等，它們可以通過(guò)分泌抗生素、酶類等物質(zhì)抑制或殺死植物病原微生物，減少病蟲(chóng)害的發(fā)生。
誘導(dǎo)植物抗病性：一些有益微生物可以激活植物自身的免疫系統(tǒng)，使植物產(chǎn)生抗病性。例如，用熒光假單胞菌處理植物種子或根系，可誘導(dǎo)植物產(chǎn)生對(duì)多種病原菌的抗性，降低病害發(fā)生率。
農(nóng)產(chǎn)品保鮮與加工
生物保鮮：某些微生物產(chǎn)生的抗菌物質(zhì)可用于農(nóng)產(chǎn)品的生物保鮮。例如，乳酸菌產(chǎn)生的細(xì)菌素具有抑制腐敗菌和病原菌的作用，將其應(yīng)用于水果、蔬菜、肉類等農(nóng)產(chǎn)品的保鮮，可延長(zhǎng)農(nóng)產(chǎn)品的貨架期。
食品發(fā)酵：在農(nóng)產(chǎn)品加工中，微生物保藏中心的多種微生物菌株被廣泛用于發(fā)酵過(guò)程，如釀酒酵母用于酒類發(fā)酵，乳酸菌用于酸奶、泡菜等發(fā)酵食品的生產(chǎn)，這些微生物不僅能改善食品的風(fēng)味和品質(zhì)，還能提高食品的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和保存性。

美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心（ATCC）的發(fā)展歷程如下：
起源與成立：其前身可追溯至 1921 年，當(dāng)時(shí)美國(guó)陸軍醫(yī)學(xué)博物館接收了著名的溫斯洛培養(yǎng)物收藏，該收藏由美國(guó)細(xì)菌學(xué)家協(xié)會(huì)的華盛頓特區(qū)成員負(fù)責(zé)照料。1925 年，ATCC 正式成立，成為一個(gè)官方實(shí)體，當(dāng)時(shí)保藏的培養(yǎng)物被轉(zhuǎn)移到芝加哥的麥考密克研究所。
早期發(fā)展：1937 年，培養(yǎng)物又遷回華盛頓，隨著收藏的培養(yǎng)物不斷增加和多樣化，空間逐漸變得緊張，ATCC 經(jīng)歷了一系列搬遷，以尋找更大的場(chǎng)地來(lái)容納不斷增長(zhǎng)的生物資源。
中期發(fā)展：在成立后的幾十年里，ATCC 主要依賴政府資金維持運(yùn)營(yíng)。它逐漸發(fā)展成為世界上最大的生物資源中心，保藏的生物材料涵蓋細(xì)菌、真菌、病毒、細(xì)胞系等多種類型。1981 年，ATCC 有 39,000 多培養(yǎng)物發(fā)放給全世界的科學(xué)工作者，并成功地用冷凍和冷凍干燥的方法保存各種細(xì)胞品系。
現(xiàn)代轉(zhuǎn)型：1993 年，雷蒙德?賽普斯擔(dān)任 ATCC 的負(fù)責(zé)人，他致力于重振該組織，提升其在生物科學(xué)領(lǐng)域的知名度，并大力倡導(dǎo)生物研究的標(biāo)準(zhǔn)制定。在他的領(lǐng)導(dǎo)下，ATCC 從一個(gè)單純的非營(yíng)利性保藏機(jī)構(gòu)轉(zhuǎn)變?yōu)橥苿?dòng)生物科學(xué)發(fā)展的重要資源中心。到 21 世紀(jì) 10 年代，ATCC 已成功實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)型，在生物科學(xué)研究領(lǐng)域發(fā)揮著關(guān)鍵作用。
設(shè)施與合作：如今，ATCC 總部位于弗吉尼亞州馬納薩斯，擁有一座 126,000 平方英尺的建筑，其中包括 18,000 平方英尺的生物材料保藏庫(kù)和 35,000 平方英尺的實(shí)驗(yàn)室空間。ATCC 還與全球多個(gè)國(guó)際培養(yǎng)物保藏中心建立了合作關(guān)系，如英國(guó)的國(guó)家植物病原菌收集中心、比利時(shí)的微生物協(xié)調(diào)收集中心、德國(guó)微生物菌種保藏中心、日本生物資源研究收藏中心等，共同推動(dòng)全球生物資源的保藏和研究工作。

菌種的培育和復(fù)蘇是微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和應(yīng)用中的重要環(huán)節(jié)，以下分別介紹其一般步驟：
菌種培育
培養(yǎng)基制備
根據(jù)所培養(yǎng)菌種的營(yíng)養(yǎng)需求，選擇合適的培養(yǎng)基配方。例如，培養(yǎng)細(xì)菌常用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，培養(yǎng)真菌可用馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基。
準(zhǔn)確稱量各成分，溶解于適量蒸餾水中，調(diào)節(jié) pH 值至適宜范圍。如細(xì)菌培養(yǎng)基一般 pH 值在 7.0 - 7.5，真菌培養(yǎng)基 pH 值在 5.0 - 6.0。
分裝到培養(yǎng)容器中，如試管、三角瓶等，進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。一般在 121℃，103.4kPa 條件下滅菌 15 - 20 分鐘。
接種
在無(wú)菌條件下，采用適當(dāng)?shù)慕臃N方法將菌種接入培養(yǎng)基。常用的接種方法有平板劃線法、涂布平板法、穿刺接種法等。
平板劃線法是用接種環(huán)蘸取少量菌液，在平板培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線，使菌種分散，經(jīng)培養(yǎng)后形成單個(gè)菌落。涂布平板法是將菌液均勻涂布在平板培養(yǎng)基表面，適用于需計(jì)數(shù)的菌種。穿刺接種法是用接種針將菌種穿刺接入固體培養(yǎng)基中，常用于保存厭氧菌種或觀察細(xì)菌的運(yùn)動(dòng)性。
培養(yǎng)
根據(jù)菌種的特性，選擇適宜的培養(yǎng)條件，包括溫度、濕度、光照和氣體環(huán)境等。如大腸桿菌一般在 37℃培養(yǎng)，而霉菌通常在 25 - 28℃培養(yǎng)。
需氧菌一般在有氧條件下培養(yǎng)，可采用搖床培養(yǎng)或靜置培養(yǎng)。厭氧菌則需在無(wú)氧環(huán)境中培養(yǎng)，可使用厭氧培養(yǎng)箱或厭氧袋等設(shè)備。
菌種復(fù)蘇
準(zhǔn)備工作
查閱菌種的相關(guān)資料，了解其特性、保存條件和復(fù)蘇方法。
準(zhǔn)備好所需的培養(yǎng)基、培養(yǎng)設(shè)備以及無(wú)菌操作工具等。
取出菌種
從低溫保存設(shè)備（如冰箱、液氮罐等）中取出保存的菌種。如果是冷凍干燥保存的菌種，需先在室溫下放置片刻，使其恢復(fù)至室溫。
接種培養(yǎng)
對(duì)于冷凍保存的菌種，可直接將菌種接種到適宜的培養(yǎng)基上。如果是冷凍干燥保存的菌種，需先加入適量的無(wú)菌水或培養(yǎng)基，輕輕振蕩使其溶解，然后再接種到培養(yǎng)基上。
按照菌種的培養(yǎng)要求，將接種后的培養(yǎng)基置于合適的培養(yǎng)條件下進(jìn)行培養(yǎng)。在培養(yǎng)過(guò)程中，要密切觀察菌種的生長(zhǎng)情況，如出現(xiàn)污染或生長(zhǎng)異常，應(yīng)及時(shí)采取措施。
不同種類的菌種在培育和復(fù)蘇過(guò)程中可能會(huì)有一些特殊要求和注意事項(xiàng)，需要根據(jù)具體菌種的特性進(jìn)行操作，以確保菌種的活性和純度。

除了 ATCC，以下是一些類似的保藏中心及其應(yīng)用：
歐洲典型培養(yǎng)物保藏中心（ECACC）：是歐洲重要的細(xì)胞庫(kù)之一。其細(xì)胞系涵蓋癌癥、遺傳疾病及轉(zhuǎn)基因研究等領(lǐng)域，支持歐洲和全球科研機(jī)構(gòu)。它強(qiáng)調(diào)可追溯性和質(zhì)量控制，為科研提供高質(zhì)量的細(xì)胞資源，可用于基礎(chǔ)生物學(xué)研究、藥物研發(fā)、疾病模型構(gòu)建等。例如在癌癥研究中，提供的癌細(xì)胞系可用于研究癌癥的發(fā)生發(fā)展機(jī)制、篩選抗癌藥物等。
日本細(xì)胞資源保藏中心（JCRB）：專注于亞洲人群相關(guān)的細(xì)胞系，以癌癥和人類疾病相關(guān)的細(xì)胞系為主，提供多樣的癌癥研究細(xì)胞資源以及人類疾病模型細(xì)胞，資源的生物信息學(xué)支持非常強(qiáng)大。可用于針對(duì)亞洲人群疾病特點(diǎn)的研究，如在研究亞洲人群高發(fā)的胃癌、肝癌等疾病時(shí)，利用其保藏的相關(guān)細(xì)胞系建立疾病模型，探索疾病的發(fā)病機(jī)制、尋找診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)等。
德國(guó)微生物與細(xì)胞培養(yǎng)物保藏中心（DSMZ）：是歐洲歷史悠久且種類豐富的細(xì)胞庫(kù)，以腫瘤研究細(xì)胞系的豐富性及質(zhì)量可靠性著稱，尤其在白血病和淋巴瘤相關(guān)細(xì)胞系上非常全面，同時(shí)還提供微生物資源。在腫瘤研究中，為白血病和淋巴瘤等疾病的基礎(chǔ)研究、藥物研發(fā)提供了重要的細(xì)胞模型，有助于深入了解疾病的病理生理過(guò)程，開(kāi)發(fā)針對(duì)性的治療藥物。此外，其微生物資源也可用于微生物學(xué)、生物技術(shù)等領(lǐng)域的研究。
韓國(guó)細(xì)胞系銀行（KCLB）：是韓國(guó)最大的細(xì)胞庫(kù)，擁有豐富的韓國(guó)人群相關(guān)的細(xì)胞系，并支持亞洲遺傳背景下的研究，尤其在藥物篩選和基因組學(xué)研究方面得到廣泛應(yīng)用。在藥物研發(fā)中，利用韓國(guó)人群相關(guān)細(xì)胞系進(jìn)行藥物篩選，可更好地模擬藥物在亞洲人群中的作用效果，提高藥物研發(fā)的成功率。同時(shí)，在基因組學(xué)研究中，為揭示亞洲人群遺傳特征與疾病的關(guān)系提供了重要的細(xì)胞資源。
中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)（CGMCC）：是中國(guó)最大的生物資源中心，涵蓋細(xì)胞系和微生物資源。專注于中國(guó)本土資源的收集和保存，尤其是中國(guó)人相關(guān)的細(xì)胞系和傳統(tǒng)中藥相關(guān)研究樣本，促進(jìn)本地化的生物醫(yī)學(xué)研究。在中藥研究方面，其保存的與傳統(tǒng)中藥相關(guān)的微生物資源可用于研究中藥的發(fā)酵炮制、中藥活性成分的生物轉(zhuǎn)化等。對(duì)于中國(guó)人相關(guān)細(xì)胞系的研究，有助于深入了解中國(guó)人群疾病的遺傳基礎(chǔ)和發(fā)病機(jī)制，為個(gè)性化醫(yī)療提供支持。
中國(guó)食品藥品檢定研究院（NIFDC）：是國(guó)家級(jí)藥物檢測(cè)和生物資源中心，提供藥物研發(fā)、毒理學(xué)和質(zhì)量控制研究所需的細(xì)胞系，嚴(yán)格遵循中國(guó)藥品審評(píng)標(biāo)準(zhǔn)，資源主要用于藥物臨床試驗(yàn)和生產(chǎn)監(jiān)督。在藥物研發(fā)過(guò)程中，為藥物的安全性評(píng)價(jià)、有效性驗(yàn)證提供細(xì)胞模型，確保藥物符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和審評(píng)要求。例如，在新藥的毒理學(xué)研究中，利用其提供的細(xì)胞系進(jìn)行藥物毒性測(cè)試，評(píng)估藥物對(duì)不同細(xì)胞類型的影響，為臨床用藥的安全性提供依據(jù)。
法國(guó)巴斯德研究所（Pasteur Institute Cell Bank）：歷史悠久，擅長(zhǎng)微生物學(xué)、免疫學(xué)和傳染病研究的資源庫(kù)，特別是與病毒感染相關(guān)的細(xì)胞系，在疫苗研發(fā)和傳染病防控領(lǐng)域有重要影響。在傳染病研究和疫苗研發(fā)中，提供的病毒感染相關(guān)細(xì)胞系可用于研究病毒的感染機(jī)制、病毒與宿主細(xì)胞的相互作用等，為開(kāi)發(fā)有效的疫苗和治療方法提供關(guān)鍵的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ汀＠?，在研發(fā)流感疫苗、新冠疫苗等過(guò)程中，利用相關(guān)細(xì)胞系進(jìn)行病毒培養(yǎng)、疫苗抗原篩選和免疫原性評(píng)估等工作。

零下20℃冰箱一般不適合用于長(zhǎng)期保存 ATCC 菌株。雖然 - 20℃冰箱可用于短期保存某些菌株，但長(zhǎng)期保存可能會(huì)導(dǎo)致菌株活力下降、基因突變等問(wèn)題，原因如下：
冰晶損傷：在 - 20℃條件下，菌株細(xì)胞內(nèi)的水分仍有可能形成較大的冰晶，這些冰晶會(huì)破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，如細(xì)胞膜、細(xì)胞器等，從而影響菌株的活力和生理特性。隨著時(shí)間的推移，這種損傷會(huì)逐漸積累，導(dǎo)致菌株的存活率降低，甚至可能使菌株失去某些關(guān)鍵的生物學(xué)功能。
生化反應(yīng)仍可發(fā)生：-20℃并不能完全抑制所有的生化反應(yīng)。菌株細(xì)胞內(nèi)的一些酶仍然可能具有一定的活性，從而引發(fā)細(xì)胞內(nèi)的代謝反應(yīng)。這些反應(yīng)可能會(huì)消耗細(xì)胞內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，產(chǎn)生一些對(duì)細(xì)胞有害的代謝產(chǎn)物，進(jìn)而影響菌株的長(zhǎng)期生存。
穩(wěn)定性問(wèn)題：-20℃冰箱的溫度穩(wěn)定性相對(duì)較差，容易受到外界環(huán)境因素的影響，如冰箱門的開(kāi)關(guān)、電源波動(dòng)等。溫度的波動(dòng)可能會(huì)導(dǎo)致菌株經(jīng)歷反復(fù)的凍融過(guò)程，即使是微小的溫度變化也可能對(duì)菌株造成損害，進(jìn)一步降低菌株的存活率和穩(wěn)定性。
相比之下，-80℃冰箱或液氮罐等低溫保存條件能夠更好地抑制冰晶形成和生化反應(yīng)，提供更穩(wěn)定的保存環(huán)境，更適合 ATCC 菌株的長(zhǎng)期保存。